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基于环介导恒温扩增微流控芯片技术检测临床和环境中常见超级细菌及重要耐药基因
应用领域:Биология и новая медицина
我有意向
国家/地区
中国
行业领域
Биология и новая медицина
简介
本课题为广东省科技计划项目,课题题目“基于环介导恒温扩增(LAMP)-微流控芯片技术检测临床和环境中常见超级细菌及重要耐药基因”。已经按合同计划完成所有研究内容,具体如下。已经完成常见超级细菌及重要耐药基因环介导恒温扩增(LAMP)方法建立及评价,包括:金黄色葡萄球菌,MRS 耐药基因mecA;粪肠球菌、屎肠球菌,万古霉素耐药基因vanA、vanB;大肠埃希菌、克雷伯菌、肠杆菌属、不动杆菌、铜绿假单胞菌,碳青霉烯酶基因NDM、KPC、IMP、VIM、GES、SPM、GIM、OXA-23、OXA-24、OXA-48、OXA-51、OXA-58,最低检测100拷贝/反应;阳性和阴性菌株符合率100%;稳定性好。 已经完成LAMP方法与金标准方法比较,敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值、准确性均>90%为合格。已经完成多重LAMP-微流控芯片的制作,利用微电子机械系统(MEMS)与微流体技术,芯片中央为加样池,每个LAMP反应为一个通道(包括扩增池、连接管道和毛细管通道),扩增池体积设定为5μl并包被LAMP引物,恒温水浴箱中63℃完成反应。已经完成便携式多功能恒温金属浴仪器研发:包括温控底座和盖子,温度范围60~65℃,温度精度0.1℃。底座上方中央设置凹槽用于安放样品架,样品架包括96孔PCR仪标准板、自行设计的放芯片的样品架,既适用于普通LAMP反应,也适用于芯片。本研究首次建立检测常见超级细菌及重要耐药基因的多重LAMP-微流控芯片,方法敏感特异、大大降低成本、不需昂贵仪器、方法简单快速、结果肉眼直接观察,为超级细菌防治提供早期准确快速低成本的诊断方法及配套仪器。
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