本项目按计划已经完成临床常见超级细菌及重要耐药基因的多重荧光定量PCR试剂盒体系优化。已经按照SYBR Premix Ex Taq试剂盒说明书推荐的各组分浓度，建立单重实时荧光定量PCR体系，进行熔解曲线分析Tm值。在单重荧光定量PCR体系基础上，应用矩阵优势法优化多重荧光定量PCR反应体系，对扩增产物进行熔解曲线分析，通过Tm值区分不同靶基因。已经完成所有靶基因重组质粒标准品的制备、多重荧光定量PCR 试剂盒标准曲线制备、敏感性检测、特异性检测、重复性和稳定性检测。本项目按计划已经完成临床常见超级细菌及重要耐药基因多重荧光定量PCR试剂盒评价及应用已经完成多重荧光定量PCR 试剂盒评价，本项目组已针对超级细菌常见重要耐药基因建立了普通PCR 及测序验证的方法，已完成2000 多株超级细菌重要耐药基因的结构功能研究，利用这些菌株对本项目试剂盒进行评价，要求符合率>95%，本项目先对所有靶基因分别单独评价，分别选取阳性及阴性菌株共100株进行评价，对低于95%的靶基因重新设计，故在此基础上，最后完成的多重荧光定量PCR试剂盒符合率均>95%。已经完成多重荧光定量PCR试剂盒的应用，对项目负责人所在南方医科大学南方医院的临床和环境中新分离的约2000株超级细菌，进行MRS、万古霉素耐药基因和碳青霉烯酶基因检测，与普通PCR及测序方法的符合率均>95%，检测结果已经用于医院感染控制。