简介
本研究通过合成的MOG34-56+KLH与本课题组构建并提取纯化的rhMOG1-125,与福氏佐剂制备乳剂来免疫诱导食蟹猴制备MS/EAE模型。rhMOG1-125是表达于人源髓鞘少突胶质细胞的保守的胞外抗原结构域,本实验将rhMOG1-125外源基因克隆至pET-28a(+)载体中,利用该载体本身带有的6×His标签,选择插入的酶切位点为NcoI和XhoI,使表达的组氨酸标签位于目的蛋白的下游,便于后续的分离纯化。该重组蛋白为糖蛋白,且含有半胱氨酸(Cys),大肠杆菌原核表达系统中缺乏糖基化体系,因此,该非糖基化重组蛋白以包涵体形式表达。通过对该重组工程菌表达条件进行优化,确定合适的诱导浓度、诱导时间和收菌时间。最终获得可用于诱导制备食蟹猴MS/EAE模型的重组蛋白。研究分别使用人源MOG胞外抗原结构域rhMOG1-125重组蛋白及关键致脑炎抗原表位MOG34-56+KLH分别作为免疫原免疫食蟹猴制备EAE模型。将抗原与CFA混成免疫乳剂皮下多点免疫食蟹猴,注射PTX打开血脑屏障。20天以后临床评分低于2分者追加免疫抗原/IFA乳剂,直至临床评分≥2。从行为学和MRI影像学、病理学、免疫学等多方面进行模型评估,成功获得食蟹猴MS/EAE模型,可为MS/EAE的机制研究、新药研发及临床治疗提供更加完善的实验平台。