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基于适体信标技术的HIV-1p24抗原电化学检测芯片的研究与应用
应用领域:Биология и новая медицина
我有意向
国家/地区
中国
行业领域
Биология и новая медицина
简介
(1) 课题组通过蔗糖转化酶水解底物产生葡萄糖的方法将其与非糖类标志物的酶联免疫检测联系起来,并创新性提出以此方式实现蛋白类标志物在便携式血糖仪平台上检测的新思路。由于HIV-1 p24抗原的酶联免疫试剂盒价格昂贵,我们先以AFP作为模拟靶物质进行新型电化学酶联免疫传感方法的验证,成熟之后再将HIV-1 p24抗原试剂引入。课题组已成功构建了基于葡萄糖检测的电化学ELISA法,本方法以糖化酶作为夹心免疫反应中检测抗体的酶标志物,利用纳米金作为糖化酶和检测抗体的载体,制备Ab2-glucoamylase-AuNPs,并通过透射电镜及紫外-可见法对其进行表征。免疫分析过程:夹心型酶联免疫反应后,加入酶作用底物淀粉,在酶的水解作用下产生一定浓度的葡萄糖,利用葡萄糖传感器检测产生的葡萄糖含量,通过糖化酶与葡萄糖(ELISA反应后酶水解产物)之间的线性关系计算出标本中AFP的浓度。该方法检测AFP的线性范围为0.05~100 ng mL1。为实现以便携式血糖仪作为酶联免疫分析法检测设备的目标,本部分实验利用耐热α-淀粉酶和糖化酶的协同水解作用提高糖化酶的水解效率,单位时间内同样量的糖化酶产生的葡萄糖含量明显增加,且糖化酶浓度为10 ng mL-1~0.125 g mL-1范围内时糖化酶的浓度与葡萄糖浓度呈线性关系。 (2) 课题组利用二维碳纳米材料石墨烯导电性能强、比表面积大和吸附能力良好的优点,以及Nafion能够增加石墨烯的可溶性,并可将其稳定于电极表面的特点,制成Nafion-graphene复合物膜。用此膜修饰本课题组已有应用基础的丝网印刷微电极(SPCEs),构成超灵敏电化学微电极:Nafion-graphene/ SPCEs作为新型的检测工作电极。同时结合构建具有良好特异性及敏感性的识别元件——胭脂红酸修饰分子信标,构建出新型电化学基因传感系统。该系统为电化学传感芯片在临床核酸检测中的应用打下坚实的基础,也为其它类型核酸的快速诊断提供通用平台。
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