简介
本研究从植物组织中分离和筛选得到拮抗内生细菌,并通过复筛、对峙实验等研究内生细菌对有害木层孔菌的生长发育的影响;同时运用分离代谢产物组分和对拮抗内生细菌进行突变体筛选探讨拮抗内生细菌对有害木层孔菌的生物防治机理。本研究的BSY3菌株是从万寿菊叶片中筛选出的1株内生生防细菌,它具有最广谱拮抗植物病原真菌的作用,其发酵液在100℃下处理30 min或蛋白酶K处理2 h,仍然保持良好的抑菌活性。根据形态特征、生理生化特性和gyrB基因分子鉴定相结合的方法,鉴定拮抗内生细菌BSY3为暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)。根据已知的脂肽抗生素合成相关基因序列设计了3对特异引物对BSY3菌株进行了检测,对PCR产物克隆、测序和BLAST分析,表明BSY3基因组中含有fenB和ituA基因。随后采用酸沉淀法从BSY3菌株发酵液制备出抑菌物质粗提液,平板拮抗试验确定其抑菌活性;并对活性粗提物进行HPLC分析条件优化,利用半制备柱对粗提物样品进行分离,获得4个不同组分,验证结果表明:组分2和组分3具有很强的抑菌活性;组分1表现弱抑菌活性;组分4无抑菌活性。通过MALDI-TOF-MS分析发现活性组分2中含有C14-Iturin A、C15-Iturin A和C16-Iturin A 三种脂肽抗生素;活性组分3中含有C15-Fengycin、C16-Fengycin、C17-Fengycin三种脂肽抗生素, 其中C14-Iturin A、C16-Iturin A、C16-Fengycin和C17-Fengycin 四种脂肽抗生素为活性粗提物中的主要成分。通过紫外线突变,从菌落形态差异显著的50个菌株中筛选得到3株(V19、V49和V43)拮抗活性明显增强的菌株,其拮抗活性与原始菌株相比分别提高了40%、22%和17%。该研究结果为利用BSY3菌株开发成微生物杀菌剂奠定了基础。